藏药-SCFA-宿主免疫轴研究方案

要解决什么问题

藏药干预肠道菌群后，短链脂肪酸（SCFA）谱发生变化；这些变化是否足以驱动宿主肠道屏障与黏膜免疫的重塑，往往缺乏一套前后贯通、可重复的实验设计。碎片化方案常让研究者在 SCFA 定量、屏障评估与机制验证之间反复试错。

技能如何工作

• 模块一：粪便 SCFA 绝对定量。 固定前处理流程（称样、酸化、内标、萃取、衍生化）与 DB-FFAP/HP-INNOWax 色谱条件，采用内标法定量乙酸/丙酸/丁酸，自动换算为 μmol/g 湿重，内置 LOD/LOQ 判定。
• 模块二：屏障功能多层次评估。 覆盖 ZO-1、Occludin、Claudin-1 的 WB 参数（抗体稀释比、电泳、转膜）、qPCR 引物参考（Tjp1/Ocln/Cldn1）与 H&E/IF 病理补充。
• 模块三：轴调控机制串联。 通过 Spearman 相关、热图与中介效应分析桥接 SCFA 与屏障蛋白；输出 HDAC 抑制、GPR43 激活、HIF-1 稳定等可验证假说。

执行前采集藏药干预物、模型对象、生物样本与检测目标四项参数；若用户仅关注 SCFA 而未提屏障功能，强制追问以补全因果链。

适用边界与注意点

• 引物序列与抗体货号需核对厂商最新目录；HDAC/GPR43 等机制假说需通过受体敲除或通路抑制剂实验确证。
• 本技能聚焦肠道屏障与黏膜免疫层面，不覆盖全身免疫器官或代谢组织。