藏药 Nrf2/ARE 抗氧化研究方案

要解决的问题

藏药粗提物常含色素、鞣质、黄酮等自带荧光的成分，直接套用常规氧化应激检测方案会得到被污染的数据。另一个常见问题是机制证据链断裂：测到 ROS 下降就宣称"通过 Nrf2 通路"，却缺少核转位、GSH/GSSG 等关键节点支撑。本技能把实验设计、指标检测、数据统计串成一套可执行的框架。

核心能力

• 组别设计：固定 6 组配置（空白/模型/三剂量/阳性），阳性对照默认 NAC 5 mM 或 SFN 5 μM，藏药按预处理 24 h 模式给药，抗氧化有效剂量取 IC₁₀ 的 1/10–1/2
• 指标检测：ROS（DCFH-DA，酶标仪 488/525 nm 或流式 FITC）、SOD（WST-1）、MDA（TBA + TEP 标准曲线）、GSH/GSSG 比值（DTNB + 2-VP 掩蔽）、Nrf2 核转位（免疫荧光半定量 + Western Blot 交叉验证）
• 藏药干扰处理：设"药物背景孔"扣除自发荧光，背景 > 探针信号 20% 时建议改用 DHE
• 数据处理：按数据类型选择 t-test / One-way ANOVA / Two-way ANOVA / Kruskal-Wallis，scripts/oxidative-stress-analysis.py 自动完成计算、标准曲线拟合、显著性标注和柱状图生成
• 证据链闭环：Nrf2 激活 → ARE 转录 → 下游抗氧化酶表达 → 氧化还原平衡恢复的每个环节需用 1-2 项指标支撑，缺失环节标注"待验证"

适用边界

• 试剂盒操作以各品牌说明书为准，框架不能替代具体试剂参数
• 藏药可能通过直接自由基清除、线粒体保护等非 Nrf2 机制起作用，需额外实验区分
• 体外细胞结果与动物模型存在 PK/代谢差异
• 动物实验仍需 IACUC 伦理审批，本技能不替代该流程